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1待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl,;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl,�,!�
2酶標板置4℃,包被過夜。
3洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,,用洗滌液過洗一遍將洗滌液注滿板孔后,,即甩去,之后將洗滌液注滿板孔,,浸泡1-2分鐘,,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干,。重復洗滌3-4次,。
4陰性對照孔每孔加入pbs 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl,�,!�
5酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min,�,!�
6洗板,同4,�,!�
7每孔加1:5000稀釋的hrp-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl�,!�
8酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),,孵育60min�,!�
9洗板,,同4�,!�
10每孔加tmb顯色液 100μl,,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min,�,!�
11每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應(yīng)�,!�
12分別測450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2,,終測得的od值為兩者之差w1-w2,以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾,。
13數(shù)據(jù)處理:在得出標本s和陰性對照n的 od值后,,計算s/n值。s/n***2.1為陽性判定標準,。
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