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猴基膜聚糖ELISA試劑盒說明書

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上海閔行區(qū)滬閔路6269號

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試劑準備:
1. 使用前將所有的試劑和標本緩慢均衡至室溫(18-25oc),,試劑不能直接在37oc溶解。
2. 標準品(凍干品):每瓶標準品加入標準品稀釋液1ml,,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為2000pg/ml,。準備7個稀釋標準品的ep管,,每個ep管中加入150μl的標準品稀釋液,如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度,, 標準品稀釋液(0pg/ml)直接作為空白孔,。為---實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液,。
3. 濃洗滌液:用580ml蒸餾水或去離子水將20ml濃洗滌液稀釋至600ml,,進行30倍稀釋。
樣本實驗前準備:
elisa試劑盒液體樣本:包括血清,、血漿,、尿液、胸腹水,、腦脊液,、細胞培養(yǎng)上清等,。
1血清
室溫---自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/分,。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。
2血漿:
應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇edta,、檸檬酸鈉或---作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,,離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/分,。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。
3尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/分,。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照此實行。
4細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,,用無菌管收集,。離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/分。仔細收集上清,。
5培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,,用pbsph7.2-7.4稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/分,。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。
6組織標本
切割標本后,稱取重量,。加入一定量的pbs,,ph7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆�,。標本融化后仍然保�?-8℃的溫度,。加入一定量的pbsph7.4,或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/分,。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用,。

注意事項:
1加樣:
實驗樣本過多時,,可分批次操作,以減少實驗時間延長造成的誤差,;
加酶試劑后,,用吸水紙吸干孔外試劑;
作定量試驗時,,使用加樣器加注試劑,,并經(jīng)常校正其準確性,此外,,要做到一份樣本一個移液頭,,防止交叉污染。
2.溫育:
如有兩種溫度,,盡量使用較低的溫育溫度,、較長反應(yīng)時間的條件;
用1個小溫度計放置在板孔反應(yīng)液中測量觀察,;
96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會造成“邊緣效應(yīng)”,,因此盡量采用水浴,;
3.洗板:
手工洗板時,,拍板時要垂直,避免交叉污染,,用力不能過猛,,防止抗原抗體復(fù)合物脫離;
洗板機洗板時應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,,若被雜物堵塞時可用-針頭挑出,;
為了洗滌效果好,實驗室可采用機器與人工洗滌相結(jié)
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apple stem grooving virus(asgv)蘋果莖溝---rt-pcr試劑盒
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