上海谷研實(shí)業(yè)有限公司為您提供兔骨骼肌特-受體酪氨酸激酶elisa試劑盒說(shuō)明書(shū),。產(chǎn)品全稱(chēng):兔骨骼肌特---受體酪氨酸激酶 elisa試劑盒
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心酶標(biāo)免疫分析法測(cè)定標(biāo)本中aif水平,。用純化的抗體包被微孔板,,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入aif抗原,、生物素化的抗小鼠aif抗體,、hrp標(biāo)記的親和素,經(jīng)過(guò)---洗滌后用底物tmb顯色,。tmb在---化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的aif呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度od值,,計(jì)算樣品濃度。
試劑配制:
1,、酶聯(lián)板assay plate :一塊96孔或者48孔,。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard:2瓶?jī)龈善贰?br />
3,、樣品稀釋液sample diluent:1×20ml/瓶,。
4,、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent:1×10ml/瓶,。
5、辣根---化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent:1×10ml/瓶,。
6,、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody:1×120μl/瓶1:100
7、辣根---化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin:1×120μl/瓶1:100
8,、底物溶液tmb e:1×10ml/瓶,。
9、濃洗滌液wash buffer:1×20ml/瓶,,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍,。
10、終止液stop solution:1×10ml/瓶2n h2so4,。
操作流程:
1待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl,;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl,。
2酶標(biāo)板置4℃,,包被過(guò)夜。
3洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,,用洗滌液過(guò)洗一遍將洗滌液注滿板孔后,,即甩去,,之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,,間歇搖動(dòng),。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次,。
4陰性對(duì)照孔每孔加入pbs 50μl,,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。
5酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),,孵育60min,。
6洗板,同4,。
7每孔加1:5000稀釋的hrp-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl,。
8酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min,。
9洗板,,同4。
10每孔加tmb顯色液 100μl,,輕輕混勻10s,,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
11每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應(yīng),。
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