上海酶聯生物科技有限公司為您提供bfr-k1大額牛腎細胞。

細胞名稱: bfr-k1大額牛腎細胞
種屬來源: 大額牛
組織來源: 腎
特       征: 正常
細胞形態(tài): 上皮細胞樣
生長特性: 貼壁生長
培 養(yǎng) 基: m-199: with earle＇s balanced salts solution (ebss)  15%nbs
生長條件: 氣相：空氣,，95%,；---,，5%; 溫度：37 ℃, 
傳代方法: 1：2至1：6,，每周2次,。
凍存條件: 90% 完全培養(yǎng)基+10% dmso,，液氮儲存
支原體檢測: 陰性


特點和簡介
該細胞系來源于一雄性新生大額牛的腎組織,。2000年由zhong國科學院昆明細胞庫建立。


接受后處理
1)  收到細胞后,，請檢查是否漏液,，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們,。


2)  請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),，去掉封口膜并將t25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。


3)  棄去t25瓶中的培養(yǎng)基,，添加6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基,。


4)  如果細胞密度達80%-90%請及時進行細胞傳代,，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基,。


5)  接到細胞次日，請檢查細胞是否污染,，若發(fā)現污染或---污染,，請及時與我們取得聯系。


培養(yǎng)操作
1復蘇細胞：將含有 1ml 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4ml 培養(yǎng)基混合均勻,。在 1000rpm 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2ml 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜,。第二天換液并 檢查細胞密度,。


2細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。


1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 pbs 潤洗細胞 1-2 次,。


2. 加 1ml ---液0.25%trypsin-0.53mm edta于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中--- 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞---情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。




3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000rpm 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2ml 培養(yǎng)液后吹勻。


4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。


3 bfr-k1大額牛腎細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)---時,，可進行細胞凍存。下面 t25 瓶為類,；


1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，pbs 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,，細胞變圓脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止---，可使用血球計數板計數,。


2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加入血 清和 dmso,，輕輕混勻,，dmso 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,，注意凍存管做好標識,。


3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱,，2 個小時以后轉入液氮灌儲 存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。




培養(yǎng)注意事項
1.收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現象，若有上述現 象發(fā)生請及時和我們聯系,。


2.仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基,、血清比例、所 需細胞因子等,，---細胞培養(yǎng)條件一致,。若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現問 題，責任由客戶自行承擔,。


3.用 75%酒精擦拭細胞瓶表面,，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶壁脫落,，將細胞置于培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察,。此時多數細胞均 會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力,，如果證實細胞活力正常,， 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結果顯示細胞無活力,，請拍下 照片及時和我們聯系,，信息確認后我們?yōu)槟�再免費寄送一次。


4.靜置細胞貼壁后,，請將細胞瓶內的培養(yǎng)基倒出,，留 6~8ml 維持細胞正常培養(yǎng)，待細 胞匯合度  80%左右時正常傳代,。


5.請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng),。培養(yǎng)瓶內多余的培養(yǎng)基可收集備用，細胞 傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件,。


6.建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài),，便于和我司技術 部溝通交流,。 bfr-k1大額牛腎細胞由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯 系,，告知細胞的具體情況，以便我們的------回訪直至問題解決,。


7.該細胞僅供科研使用,。

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