上海酶聯(lián)生物科技有限公司為您提供hem15a人zigong內(nèi)膜異位癥huizhe在位內(nèi)膜間質(zhì)細胞永生化細胞,。

細胞名稱:         hem15a人zi gong內(nèi)膜異位癥hui zhe在位內(nèi)膜間質(zhì)細胞永生化細胞
種屬來源:         人
組織來源:         zi gong
特      征:         內(nèi)膜異位
細胞形態(tài):         梭形
生長特性:         貼壁生長
培 養(yǎng) 基:         dmem培養(yǎng)基,，90%,；fbs,，10%,。
生長條件:         氣相：空氣,，95%,；---,，5%; 溫度：37 ℃, 
傳代方法:         1：2至1：6,，每周2次,。
凍存條件:         90% 完全培養(yǎng)基+10% dmso，液氮儲存
支原體檢測:       陰性


特點和簡介
er+,；pr+


hem15a人zi gong內(nèi)膜異位癥hui zhe在位內(nèi)膜間質(zhì)細胞永生化細胞接受后處理
1) 收到細胞后,，請檢查是否漏液 ，如果漏液,，請拍照片發(fā)給我們,。


2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長 狀態(tài)，去掉封口膜并將t25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h,。


3) 棄去t25瓶中的培養(yǎng)基,，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。


4) 如果細胞密度達80%-90%請及 時進行細胞傳代,，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基,。


5) 接到細胞次日，請檢查細胞是 否污染,，若發(fā)現(xiàn)污染或---污染,，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。


培養(yǎng)操作
1復蘇細胞：將含有 1ml 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4ml 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000rpm 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補 加 1-2ml 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜,。第二天換液并 檢查細胞密度。


2細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。


1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 pbs 潤洗細胞 1-2 次,。


2. 加 1ml ---液0.25%trypsin-0.53mm edta于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中--- 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞---情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。


3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000rpm 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2ml 培養(yǎng)液后吹勻。


4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。


3細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)---時,，可進行細胞凍存。下面 t25 瓶為類,；


1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，pbs 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止---，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。


2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 dmso,，輕輕混勻,，dmso 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,，注意凍 存管做好標識。


3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱,，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。




注意事項
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及 時和我們聯(lián)系。


2. 仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關(guān)信息,，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例,、所 需細胞因子 等,，---細胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問 題,，責任由客戶自行承擔,。


3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶 壁脫落,，將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細胞均 會貼壁,，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力,，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng),；如果染色結(jié)果顯示細胞無活 力,，請拍下 照片及時和我們聯(lián)系，信息確認后我們?yōu)槟�再免費寄送一次,。


4. 靜置細胞貼壁后,，請將細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8ml 維持細胞正常培養(yǎng),，待細 胞匯 合度  80%左右時正常傳代,。


5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用,，細胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件。


6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài),，便于和我司技術(shù) 部 溝通交流。由于運輸?shù)脑���,，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián) 系，告知細胞的具體情況,，以便我們 的------回訪直至問題解決,。


7.該細胞僅供科研使用。

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