寡核苷酸合成

合成完畢后

亞-胺寡核苷酸合成為例介紹該類儀器的一般操作步驟,。

亞-胺dna合成的試劑有：保護堿基的5／—dmt,，a、g,、c,、t亞-胺單體，四唑偶聯(lián)催化劑,，乙酐,，n—甲1基咪唑封閉試劑，tca脫保護溶液,，寡核苷酸合成儀,，12氧化混合物，乙1腈清洗溶劑,，-切除溶液,。使用步驟如下：

1、仔細檢查合成儀上所有試劑瓶中的試劑量,，-時換掉試劑瓶,，--合成儀，-注意乙1腈的量,，因為該溶劑用量較大,。

2、將標記好的清潔的收集瓶裝在合成儀上,。

3,、將要合成的dna序列輸入合成儀。

4,、檢查選擇的合成步驟是否正確,。

5、選擇結(jié)束方法：儀器的原始狀態(tài),，若打算以5,，—dmt基團連接純化寡核苷酸，-合成,，將其轉(zhuǎn)變?yōu)榻Y(jié)束狀態(tài)。

6,、選擇結(jié)束方法,，一般為系統(tǒng)的原始狀態(tài)。

7,、在每個柱-的username下,，探針-合成儀,，輸入你所希望的保存名字。

8,、以代碼代替相應(yīng)的dna序列標記每一個收集瓶,。

9、打印出每一個柱設(shè)置的詳細資料,。

10,、檢查打印出來的資料是否正確。

11,、運行startcolumn步驟檢查每一個柱的位置,，-合成儀上合成柱處于正確的位置。

12,、檢查連接在合成儀上的溶劑殘留廢液瓶是否充滿,。

13,、如果分部收集器用來收集每個dmt脫保護步驟的流出物,，-試管充分清潔干凈，并打開分部收集器,，-dmt廢液管路通向分部收集器,。

14、啟動循環(huán),，運行開始程序清洗試劑管路,，除去原來的試劑。

引物dna合成儀

引物dna合成儀是靈活性-的合成智能解決系統(tǒng),。同一臺儀器可以獲得不同的合成方案,，客戶能夠根據(jù)自己實驗室的具體要求設(shè)計自己*的核甘酸合成儀方案。

為什么dna引物長度在15-30bp,，常用為20bp左右,？

首先引物的目的是為了特-的擴增目的產(chǎn)物，引物太短則特-不夠,，容易造成非特異擴增,，引物太長則浪費。

以20個bp為例,，由于每個位置都可以有a,，g，c,，t四種可能性,，此時物特-可以表示為  420 方1.1×1012；從數(shù)學排列組合和概率學的角度根據(jù)哺乳動物基因組3*109略小于4的16次方堿基來算,，這個數(shù)值理論上已經(jīng)超過了哺乳動物基因組的大小,，故能提供足夠的特-,。