基因組甲l基化水平(methyl ati on content)的分析:
1.高l效液相色譜(hi gh-performanceli qui dchromatography， hplc)hplc是- -種比較傳統(tǒng)的方法,，是根據(jù)dna或蛋白分子量和構(gòu)象的不同而使其加以分離,。由于在動(dòng)態(tài)相和靜態(tài)相下分子的光吸收度并不相同而加以定量。隨著系統(tǒng)的壓強(qiáng)的增加,，熒光定量pcr,，其分辨率增l高。故而能夠定量測(cè)定基因組整體水平dna甲l基化水平,。該方法由ruo等1980年首l次---,。過程是將dna樣品先經(jīng)---或氫l氟酸水解成堿基，水解產(chǎn)物通過色譜柱,，結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)品比較,，用紫外光測(cè)定吸收峰值及其量，計(jì)算5 mc/(5mc+5c)的積分面積就得到基因組整體的甲l基化水平,。這是一種檢測(cè)dna甲l基化水平的標(biāo)準(zhǔn)方法,。
2.高l效毛細(xì)管電泳法(hi gh-per formance capillary electrophoresis， hpce)這是一-種利用窄孔熔融石英毛細(xì)管來從復(fù)合物中分離不同化學(xué)組分的技術(shù),。其基礎(chǔ)是在強(qiáng)電場(chǎng)下不同分子的由于其所帶電荷,，大小，結(jié)構(gòu)以及疏水性等不同而相互分開,。用hipce方法處理dna水解產(chǎn)物來確定5mc水平,，簡便，經(jīng)濟(jì)且敏感性高,。
線粒體測(cè)序
線粒體是真核生物的重要細(xì)胞器,，安康pcr，是生物體的能量工廠,，參與能量代謝,、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),、細(xì)胞凋亡等許多生命活動(dòng)，對(duì)生物的生理活動(dòng)起著---的作用,。大部分線粒體基因由于其母系遺傳特性以及進(jìn)化速率較快等特點(diǎn),，被廣泛地用于種群遺傳學(xué)、進(jìn)化生物學(xué),、譜系地理學(xué)和系統(tǒng)發(fā)育學(xué),、---診斷等學(xué)科領(lǐng)域。線粒體全基因組在生物進(jìn)化的研究中具有的優(yōu)勢(shì),。由于線粒體有著與真核生物長期共生的進(jìn)化歷史,，因此其基因組包含了反映物種進(jìn)化的關(guān)鍵信息，同時(shí),，相對(duì)于核基因組,，線粒體基因組小，容易對(duì)大量物種進(jìn)行橫向的比較分析,，有利于生物進(jìn)化的研究,，因而受到進(jìn)化生物學(xué)家的---。線粒體的組成可以從兩個(gè)層面上反映物種及群體的遺傳和進(jìn)化,，即---序列組成和基因組的結(jié)構(gòu)特征,，兩者的特征具有不同的進(jìn)化機(jī)制和進(jìn)化速度，在進(jìn)化生物學(xué)研究中可以---的互補(bǔ),。
11.如何溶解引物,？
答：干燥后的引物質(zhì)地非常疏松，開蓋前好離心一下,，或管垂直向上在桌面上敲敲,，將引物粉末收集到管底。根據(jù)計(jì)算出的體積加入去離子無菌水或10mm tris ph7.5緩沖液,，室溫放置幾分鐘,，---，振蕩助溶,，離心將溶液收集到管底,。溶解引物用的水一般不要用蒸餾水，因?yàn)橛行┱麴s水的ph值比較低ph4-5,，---多少錢,，引物在這種條件下不穩(wěn)定。
12.如何保存引物,？
答：引物合成后，經(jīng)過一系列處理和純化步驟,，旋轉(zhuǎn)干燥而成片狀物質(zhì),。引物在溶解前,，室溫狀態(tài)下可以長期保存。溶解后的引物-20度可以長期保存,。如果對(duì)實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性要求較高,，合成的od數(shù)較大，建議分裝,，避免反復(fù)凍融,。修飾熒光引物需要避光保存。
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