mullis起初使用的dna聚合酶是 dna 聚合酶 i 的klenow片段,,1988年初,,keohanog改用t4 dna聚合酶進行pcr,,其擴增的dn---段很均一,,真實性也較高,,只有所期望的一種dn---段,。但每循環(huán)一次,,仍需加入新酶,。1988年saiki 等從溫泉中分離的一株水生嗜thermus aquaticus 中提取到一種耐熱dna聚合酶,。
此酶具有以下特點:
耐高溫,在70℃下反應(yīng)2h后其殘留活性大于原來的90%,,迷你pcr儀報價,,在93℃下反應(yīng)2h后其殘留活性是原來的60%,在95℃下反應(yīng)2h后其殘留活性是原來的40%,。
在熱變性時不會被鈍化,,不必在每次擴增反應(yīng)后再加新酶。
---提高了擴增片段特---和擴增效率,迷你pcr儀多少錢,,增加了擴增長度2.0kb,。由于提高了擴增的特---和效率,因而其靈敏性也---提高,。為與大腸多聚酶iklenow片段區(qū)別,,將此酶命名為taqdna多聚酶taq dnapolymerase。此酶的發(fā)現(xiàn)使pcr廣泛的被應(yīng)用,。
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實時熒光定量pcr儀
在普通pcr儀的基礎(chǔ)上增加一個熒光信號采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng),就成了熒光定量pcr儀,。其pcr擴增原理和普通pcr儀擴增原理相同,,只是pcr擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記,,使用引物和熒光探針同時與模板特---結(jié)合擴增,。擴增的結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng)得出量化的實時結(jié)果輸出。把這pcr儀叫做實時熒光定量pcr儀(qpcr儀),。熒光定量pcr儀有單通道,,雙通道,和多通道,。當只用一種熒光探針標記的時候,,選用單通道,有多熒光標記的時候用多通道,。單通道也可以檢測多熒光的標記的目的基因表達產(chǎn)物,,因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量,需多次擴增才能檢測完不同的目的基因片段的量,。該儀器主要用于醫(yī)學(xué)---檢測,,生物醫(yī)研發(fā),食品行業(yè),,科研院校等機構(gòu),。
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普通的pcr儀
把一次pcr擴增只能運行一個特定退火溫度的pcr儀,,叫傳統(tǒng)的pcr儀,,也叫普通pcr儀。如果要做不同的退火溫度需要多次運行,。主要是做簡單的,對目的基因退火溫度的擴增,。該儀器主要應(yīng)用于科研研究,,教學(xué),醫(yī)學(xué)---,,迷你pcr儀,,檢驗檢疫等機構(gòu)。
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