骨sui內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離培養(yǎng)
方法:使用密度梯度離
心法汲差速貼壁法聯(lián)合的方法培養(yǎng)內(nèi)皮祖細(xì)胞,,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況及形態(tài)變化,,海南細(xì)胞,使用dil標(biāo)記的---化低密度脂蛋白和fitc標(biāo)記的荊豆凝集素1雙熒光染色,、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面抗原cd34,、cd133 表達(dá)情況.結(jié)果與結(jié)論:培養(yǎng)前4 d---不明顯第5~10天迅速增殖,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包,,并可見細(xì)胞集落及線狀結(jié)構(gòu)形成培養(yǎng)第7天的內(nèi)皮祖細(xì)胞具有吞噬dil標(biāo)記的---化低密度脂蛋白和fitc標(biāo)記的荊豆凝集素1的功能流式細(xì)胞儀檢測(cè)體外培養(yǎng)第十天的細(xì)胞,,cd133+細(xì)胞占19.2%,cd34+細(xì)胞占28.7%,,cd34+ /cd133+細(xì)胞占19.1%.說明密度梯度離心法聯(lián)合差速貼壁法可在體外有效分離培養(yǎng)大鼠骨sui內(nèi)皮祖細(xì)胞.
細(xì)胞實(shí)驗(yàn)介紹——細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力檢測(cè):
細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)是體-擬細(xì)胞遷移能力和修復(fù)能力快捷的檢測(cè)方法,。在長(zhǎng)滿的細(xì)胞培養(yǎng)板或者培養(yǎng)皿中,沿著中線使用移液器槍頭或者其他硬物劃1-3條平行的直線,,去除中線的細(xì)胞,,細(xì)胞系,細(xì)胞在0h,、12h,、24h后,,細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn),觀察細(xì)胞往中線遷移情況,,判斷細(xì)胞遷移能力,。
一般流程:細(xì)胞接種培養(yǎng)-劃痕-不同時(shí)間點(diǎn)拍照
細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)是體-擬細(xì)胞遷移和侵襲能力的檢測(cè)方法。使用不同孔徑的聚---膜transwell小室放入培養(yǎng)板中,,將細(xì)胞接種于小室中,,利用培養(yǎng)液成分的差異-細(xì)胞運(yùn)動(dòng),檢測(cè)細(xì)胞的遷移和侵襲能力的差異,。
一般流程:transwell小室準(zhǔn)備-細(xì)胞接種-細(xì)胞培養(yǎng)-transwell小室染色-顯微鏡拍照
結(jié)果示例:
圖 a 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)圖,;b,c 細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)圖
yao物對(duì)細(xì)胞的ic50檢測(cè)
ic50 (half maximal inhibitory concentration)是指被測(cè)量的拮抗劑的半抑制濃度,。它能指示某一yao物或者物質(zhì)(yi制劑)在抑制某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物質(zhì),,比如酶,細(xì)胞受體或是微生物)的半量,。在凋亡方面,,可以理解為一定濃度的某種藥wu-腫liu細(xì)胞凋亡50%,該濃度稱為50%抑制濃度,,即凋亡細(xì)胞與全部細(xì)胞數(shù)之比等于50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的濃度,,ic50值可以用來衡量yao物-凋亡的能力,即-能力越強(qiáng),,該數(shù)值越低,,當(dāng)然也可以反向說明某種細(xì)胞對(duì)yao物的耐受程度。
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