大鼠shen小球內(nèi)皮細胞分離培養(yǎng)

2.原代細胞培養(yǎng):(1)shen臟原位灌洗:sd大鼠用25%烏拉坦腹整注-zui后仰臥固定,。胸腹部消森并分離胸主動脈，以無菌的冷hank液漱朱洗血.同時剪破shen靜脈利于液體流出,。1-2min后shen臟色澤變白,，取出雙shen冰浴保存。

(2)shen小球分離:參照green等方法改進,。將灌洗后的shen臟撕下shen被膜.去除髓質(zhì)后將皮質(zhì)剪成約1-2mm的碎塊,，輕碾shen皮質(zhì)依次通過80.120和200目鋼篩。收集shen小球,。

(3)shen小球---和培養(yǎng),；將提取的shen小球加人0.1% in 型膠原酶---后收集沉淀。以2x10* 的shen小球數(shù)接種于鋪有1%明膠培養(yǎng)瓶內(nèi),，加a配制好的內(nèi)皮細胞培養(yǎng)液(mfm.hepes 20 mmnovl 20%胎牛xue清0. 66 u---/ml.血管內(nèi)皮生長因子20 ng /ml,、---鈉100 u/ml.青莓su100 u/ml、鏈霉su100 μ/ml) .靜止培養(yǎng)3 d后逐日觀察shen小球的貼壁情況,。待shen小球充分貼壁后常規(guī)換液.第3同進行純化,。

---檢測

     本公司應用mtt比色法， 檢測細胞存活和生長,。其檢測原理為huo細胞內(nèi)線粒體中的---脫氫酶能催化外源性無色的mtt形成藍色的結晶formazan,，并沉積在細胞中，而---無此功能。二jia基---dmso能溶解細胞中的formazan,，用酶聯(lián)mian疫檢測儀在一定波長處測定其光吸收值,，吉林細胞，可間接反映huo細胞數(shù)量,。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi),，mtt結晶形成的量與細胞數(shù)成正比。

     該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測,、-的抗腫liu藥wu篩選,、細胞毒性試驗、以及腫liu放she敏感性測定等,。服務內(nèi)容      1. 細胞接種：收到客戶細胞后,，癌細胞，我們會用細胞計數(shù)板計數(shù)細胞,，得出細胞懸液濃度,。計算出應稀釋的倍數(shù)，按mtt試劑盒要求在96孔板內(nèi)接種 相應濃度的細胞懸液,；

     2. 細胞培養(yǎng)：然后在無菌恒溫細胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)接種好的96孔細胞培養(yǎng)板,，并實時觀察細胞狀態(tài)；  

     3. yao物處理并呈色：按不同濃度梯度加入yao物作用細胞,；

     4. 溶解,，流式細胞技術，比色：加入mtt檢測試劑,，按操作要求孵育相應時間,，在mei標儀內(nèi)檢測對照組和實驗組的吸光值。并處理數(shù)據(jù)得出比色結果,。