熒光現(xiàn)象的原理將熒光物體放到光譜中的各域,,就可發(fā)現(xiàn)引起熒光的光線是光譜上波長較短的區(qū)域,,即近紫外線區(qū)域,,波長約為320-400nm。這種現(xiàn)象的實質(zhì)是分子吸收了短光的能量波長越短,,光能越強,,又以發(fā)光的形式以波長較長和熒光射出,而為人眼可見,,這就是熒光現(xiàn)象,。熒光接近可見光的紅光端,大部分的熒光現(xiàn)象是符合這一規(guī)律的,。熒光現(xiàn)象可分為兩種:1.次熒光現(xiàn)象,;又稱固有熒光或自發(fā)熒光,當經(jīng)紫外線的照射后,,就能發(fā)出熒光的物質(zhì),;2.第二次熒光現(xiàn)象:又稱激發(fā)熒光,當經(jīng)紫外線照射后不能或只部分發(fā)生微弱的熒光,,這樣就需先用熒光素處理,,再經(jīng)紫外線照射才能發(fā)生熒光,這是因組織內(nèi)吸附或溶解有熒光素的緣故,。
光學(xué)顯微鏡不同種類的照明光源早期的顯微鏡依靠油燈和自然的陽光,,他們的原始但往往---確顯微鏡提供外部照明光源。他們往往雇用相當巧妙的方法,,如收集光從一個大的白板上或在陰天的散射陽光的反射,。不幸的是,這些方法沒有提供---的照明和經(jīng)常視場照明的面積---超過物鏡的數(shù)值孔徑,,引起眩光和水浸,。光學(xué)顯微鏡不同種類的照明光源(圖1)現(xiàn)代顯微鏡通常有一個不可分割的光源,可以控制到相對高的程度,。今天的顯微鏡常見的來源是白熾鎢鹵素?zé)襞莸姆瓷錃んw中定位,,投射光通過聚光透鏡到臺下聚光。通過可變的可變電阻器,,通常集成到顯微鏡支架燈電壓控制,。如圖1所示是一個典型的照明燈和住房。燈泡是一個操作上的12伏的直流dc電壓,,徠卡金相顯微鏡經(jīng)銷商,,并產(chǎn)生---100瓦的功率進行照明的鹵鎢燈。燈電壓控制的直流電源,,通常內(nèi)置在顯微鏡殼體,,徠卡金相顯微鏡供銷,用電壓控制旋鈕,,邢臺徠卡金相顯微鏡,,通常是一個電位器上的某個地方安裝顯微鏡支架,。這些燈泡在操作過程中產(chǎn)生大量的熱量,在殼體上設(shè)置有散熱片的一些層,,以幫助消散多余的熱量,。燈泡的位置是由一系列的旋鈕控制照明器殼體的側(cè)面上,或預(yù)先為本專為殼體,。燈箱的光通過聚光透鏡圖1引導(dǎo)到顯微鏡的基礎(chǔ)上,,然后通過燒結(jié)玻璃擴散器的冷凝器上的孔徑光闌被-前經(jīng)常。
熒光顯微攝影由于熒光圖像一般均較明場觀察暗得多,,所以進行熒光顯微攝影需要較長的---時間,,在---時應(yīng)注意避免熒光顯微鏡震動。為了縮短---時間,,徠卡金相顯微鏡銷售,,可選擇倍率較低的攝影目鏡或感光度較高的攝影膠片如asa200以上或din24以上。熒光顯微鏡攝影技術(shù)對于記錄熒光圖像十分---,,由于熒光很易褪色減弱,,要即時攝影記錄結(jié)果。方法與普通顯微攝影技術(shù)基本相同,。因紫外光對熒光猝滅作用大,,如fitc的標記物,在紫外光下照射30s,,熒光亮度降低50%,。所以,---速度太慢,,就不能將熒光圖像拍攝下來,。一般研究型熒光顯微鏡都有半自動或全自動顯微攝影系統(tǒng)裝置。
|