動(dòng)物睡眠剝奪模型,,睡眠剝奪是研究睡眠的功能與發(fā)生機(jī)制的重要方法。睡眠剝奪模型的選擇將直接影響睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)的---性及準(zhǔn)確性對(duì)睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有重要的影響�,,F(xiàn)將幾種常用的睡眠剝奪模型的方法評(píng)價(jià)及進(jìn)展情況綜述如下,。
1.平臺(tái)睡眠剝奪技術(shù)
此類方法主要是利用大鼠畏水及在水中無(wú)法進(jìn)入睡眠的生活習(xí)性,通過(guò)在盛水的水槽中放置平臺(tái),,讓大鼠站立在平臺(tái)上,,因平臺(tái)直徑足夠小(直徑 6.5 cm 或更小)當(dāng)大鼠進(jìn)入 rem 時(shí),因全身肌張力降低引起節(jié)律性低頭觸水以此來(lái)達(dá)到剝奪 rem 的目的,, 此類方法簡(jiǎn)單易行無(wú)需復(fù)雜昂貴的設(shè)備,,在不同條件的實(shí)驗(yàn)室均能開(kāi)展因而應(yīng)用廣泛 其主要用來(lái)剝奪大鼠的rem ,可分為以下三種方法:
1.1單平臺(tái)睡眠剝奪法
此方法早于 1964 年被應(yīng)用在貓的睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)中,,動(dòng)物模型,,不久以后有人將此方法應(yīng)用于大鼠的睡眠剝奪實(shí)驗(yàn),方法為將一圓柱形臺(tái) (直徑約 65 m m )放置在長(zhǎng) 400 mm寬340 m m高160 mm的水槽中,,往水槽中加水至平臺(tái)露出水面約 10 mm ,,將 1 只大鼠置于臺(tái)上,大鼠可在平臺(tái)上站立,,動(dòng)物行為學(xué),,可進(jìn)入 nrem,當(dāng)大鼠進(jìn)入 rem 時(shí)全身骨骼肌張力明顯降低,,頸部肌張力降低引起節(jié)律性低頭觸水從而無(wú)法進(jìn)入 rem,,采用 sp 實(shí)驗(yàn)可引起動(dòng)物的體重及胸腺重量減輕,上腺重量增加,,血漿中上腺皮質(zhì)酮增加,,動(dòng)物攻擊行為增加,機(jī)體反應(yīng)抑制等,。
實(shí)驗(yàn)步驟
1,、實(shí)驗(yàn)之前,一定要---高架十字迷宮整個(gè)裝置的清潔。這個(gè)步驟不僅僅是要求當(dāng)天的實(shí)驗(yàn),,側(cè)重于每一次動(dòng)物實(shí)驗(yàn)完成后的清潔除味工作,,一定要去除上一只動(dòng)物在宮體內(nèi)---下來(lái)的尿液、糞便等,,盡可能創(chuàng)造一個(gè)清潔,、無(wú)味道的理想試驗(yàn)環(huán)境。同時(shí),,---前動(dòng)物實(shí)驗(yàn),,實(shí)驗(yàn)員需要記錄動(dòng)物的編號(hào)、日期,、狀態(tài)等信息,;實(shí)驗(yàn)動(dòng)物提前運(yùn)送到行為學(xué)實(shí)驗(yàn)室臨時(shí)籠架 ,
適應(yīng)環(huán)境至少3h左右,, 減少動(dòng)物緊張,。
2、將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大鼠或者小鼠從飼養(yǎng)籠中取出,,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物盡量背向?qū)嶒?yàn)員,,將動(dòng)物輕輕放在儀器宮體的中央?yún)^(qū)域,動(dòng)物細(xì)胞模型,,動(dòng)物面向開(kāi)臂,,然后實(shí)驗(yàn)員迅速安靜的離開(kāi);
3,、打開(kāi)supermaze或者visutrack動(dòng)物行為分析軟件,,---動(dòng)物在高架十字迷宮儀器內(nèi)的軌跡運(yùn)動(dòng),自動(dòng)計(jì)算指標(biāo),,通常實(shí)驗(yàn)時(shí)長(zhǎng)為5min,;
4、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,,取出實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,,放入飼養(yǎng)籠,做好實(shí)驗(yàn)完成動(dòng)物的標(biāo)記信息,,同時(shí),,用酒精和紙巾清潔迷宮。
注意事項(xiàng)
1. 針頭大小與動(dòng)物的種類有關(guān),,t 同時(shí)針頭一定要磨鈍,。
2. 檢查灌注泵的運(yùn)作情況,,一定排出管子的氣泡和空氣,,防止空氣栓塞。
3. 經(jīng)腹腔暴腔,先清楚升主動(dòng)脈外面的脂肪組織和心外膜組織,。
4. 將針頭經(jīng)左心室插入升主動(dòng)脈顏色變白的哦,,并用鉗子固定。
5. 解開(kāi)右心耳,,同時(shí)開(kāi)啟灌注泵,。注意,不要---揭開(kāi)---的其他部位,,否則有時(shí)候可能會(huì)灌注成功但是絕大部分會(huì)造成灌注不成功,,尤其。
6. 將 4 度的生理鹽水好已動(dòng)物的發(fā)白為標(biāo)準(zhǔn),,我們實(shí)驗(yàn)室的大鼠約用 250ml和--- (根據(jù)所取得材料而定) 依次灌入,。
7. 整個(gè)過(guò)程均應(yīng)將動(dòng)物放在冰上,以便于---地保存目的蛋白和酶的活性,。
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