上海酶聯(lián)生物科技有限公司為您提供人zigong內(nèi)膜ai細(xì)胞。

細(xì)胞名稱:         ---c crl-1671(rl95-2)細(xì)胞,rl95-2細(xì)胞,rl952細(xì)胞,
種屬來源:         人
組織來源:         zi gong
特      征:         zi gong內(nèi)膜ai
細(xì)胞形態(tài):         上皮細(xì)胞樣
生長特性:         貼壁生長
培 養(yǎng) 基:         d-mem/f-12培養(yǎng)基,，90%,；fbs，10%,。
生長條件:         氣相：空氣,，95%；---,，5%; 溫度：37  ℃,
傳代方法:         1：2至1：6,，每周2次。
凍存條件:         90% 完全培養(yǎng)基+10% dmso,，液氮儲(chǔ)存
支原體檢測:         陰性
安全等級(jí):         1
str:
amelogenin: x
csf1po: 10,11
d13s317: 8,12
d16s539: 11,13
d5s818: 10,11
d7s820: 10
tho1: 9,9.3
tpox: 8
vwa: 16,20

特點(diǎn)和簡介
這些細(xì)胞有α角蛋白,，定義明確的連接復(fù)合體,，張力絲和表面微絨毛。 在本庫通過支原體檢測,。 在本庫通過str檢測,。

接受后處理
1) 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液 ,，如果漏液,，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們,。
2) 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)人zi gong內(nèi)膜ai細(xì)胞生長 狀態(tài),，去掉封口膜并將t25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3) 棄去t25瓶中的培養(yǎng)基,，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基,。
4) 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%請(qǐng)及 時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng) 基,。
5) 接到細(xì)胞次日,，請(qǐng)檢查細(xì)胞是 否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或---污染,，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián) 系,。


培養(yǎng)操作
1復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1ml 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4ml 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000rpm 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2ml 培養(yǎng)基后吹勻,。然 后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng) 過夜,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2細(xì)胞傳代：如果人zi gong內(nèi)膜ai細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。     


1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 pbs 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml ---液0.25%trypsin-0.53mm edta于培養(yǎng)瓶 中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中--- 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞---情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落 ,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000rpm 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2ml 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中 或者瓶中。
3細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)---時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 t25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，pbs 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止---,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,， 根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 dmso，輕輕混勻,，dmso 終濃度為 10%,，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍 存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí),。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱,，2 個(gè)小時(shí) 以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。



培養(yǎng)注意事項(xiàng)
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象，若有上述 現(xiàn) 象發(fā)生請(qǐng)及 時(shí)和我們聯(lián)系,。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基,、血清比例、 所 需細(xì)胞因子 等,，---細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問 題，責(zé)任由客戶 自行承擔(dān),。
3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),。因運(yùn)輸問題貼壁細(xì) 胞會(huì)有少量 從瓶 壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時(shí),再取出觀察,。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均 會(huì)貼 壁,，若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán) 染色測定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常,， 請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮 培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng),；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活 力，請(qǐng)拍下 照片及時(shí)和我們聯(lián)系,，信息確認(rèn)后我們?yōu)?您再免費(fèi)寄送一次,。
4. 靜置細(xì)胞貼壁后，請(qǐng)將細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出,，留 6~8ml 維持細(xì)胞正常培 養(yǎng),，待細(xì) 胞匯 合度  80%左右時(shí)正常傳代,。
5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng),。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì) 胞 傳代時(shí)可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件,。
6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和我司技術(shù) 部 溝通交流,。由于運(yùn)輸?shù)脑�因，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián) 系 ,，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們 的------回訪直至問題解決,。
7. 該細(xì)胞僅供科研使用,。

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