上海莼試實業(yè)有限公司為您提供大鼠p選擇素p-selectinelisa檢測試劑盒說明書,。檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗elisa。往預先包被大鼠p選擇素p-selectin捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標本,、標準品,、hrp標記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并---洗滌。用底物tmb顯色,，tmb在---化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠p選擇素p-selectin呈正相關,。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度od 值,，計算樣品濃度。

樣品收集,、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)---的試管,，操作過程中避免任何細胞---，收集---后,，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。

2. 血漿：edta、檸檬酸鹽或---抗凝,。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清,。

3. 細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清,。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃,，避免反復凍融，在室溫下解凍并---樣品均勻地充分解凍,。

自備物品

酶標儀450nm
---加樣器及槍頭：0.5-10ul,、2-20ul、20-200ul,、200-1000ul
37℃恒溫箱
操作注意事項

試劑盒保存在2-8℃,，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,，這屬于正�,，F(xiàn)象，水浴加熱使結晶完全溶解后再使用,。
實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,，密封低溫干燥保存。
標準品稀釋液即可視為陰性對照或者空白,；預處理后的樣本無需稀釋,，直接取10μl加樣即可。
嚴格按照說明書中標明的時間,、加液量及順序進行溫育操作,。
所有液體組分使用前充分搖勻,。
試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標板

12孔×8條

12孔×4條

無

標準品32pg/ml

0.6ml

0.6ml

按說明書進行稀釋

標準品稀釋液

6ml

3ml

無

樣本稀釋液

6ml

3ml

無

檢測抗體-hrp

10ml

5ml

無

20×洗滌緩沖液

25ml

15ml

按說明書進行稀釋

底物a

6ml

3ml

無

底物b

6ml

3ml

無

終止液

6ml

3ml

無

封板膜

2張

2張

無

說明書

1份

1份

無

自封袋

1個

1個

無

注：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為：32、16,、8,、4、2,、1pg/ml

試劑的準備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水,。

洗板方法

手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,，在吸水紙上拍干,，如此洗板5次。
自動洗板機：每孔注入洗液350μl,，浸泡1min,，洗板5次。
操作步驟

從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μl,；
待測樣本孔先加待測樣本10μl,，再加樣本稀釋液40μl；
隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根---化物酶hrp標記的檢測抗體100μl,，用封板膜封住反應孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次也可用洗板機洗板,。
每孔加入底物a,、b各50μl，37℃避光孵育15min,。
每孔加入終止液50μl,，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的od值,。
結果判斷

繪制標準曲線：在excel工作表中,，以標準品濃度作橫坐標,，對應od值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線,，按曲線方程計算各樣本濃度值,。



試劑盒性能

1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)r值，大于等于0.9900,。

2. 靈敏度：zui低檢測濃度小于1.0pg/ml,。

3. 特---：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

4. 重復性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%,。

5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存,。

6. 有效期：6個月
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