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1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣
2.加樣:分別設(shè)空白孔空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl樣品終稀釋度為5倍。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動(dòng)混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4.配液:將3048t的20倍倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048t的20倍倍稀釋后備用,。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,拍干,。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5,。
9.顯色:每孔先加入顯色劑a50μl,,再加入顯色劑b50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。
11.測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度od值,。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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